ezsep™ c18固相萃取柱用于水产品中氯霉素的检测-必一运动

本文参照《gb 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，利用ezseptmc18固相萃取柱（1000 mg/6ml，货号：pz10304）进行净化，再用高效液相色谱串联质谱检测进行检测，建立了一种对水产品中氯霉素的分析方法。

关键词：

水产品，氯霉素，固相萃取，

1，  实验过程

1.1     仪器与试剂   

spe1000 全自动固相萃取系统，北京莱伯泰科仪器股份有限公司；

m64高通量平行浓缩仪，北京莱伯泰科仪器股份有限公司；

4500质谱系统，sciex公司；

ezseptmc18固相萃取柱（1000 mg/6ml，货号：pz10304），北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

冷冻离心机，gl-20g-ⅱ，上海安亭科学仪器厂  ；  

甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

乙腈（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

正己烷（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

乙酸乙酯（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

氯化钠（分析纯），购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2                      工作液配制

氯霉素标准储备液：100μg/ml，溶剂为甲醇，购自坛墨质检标准物质中心 。

氯霉素-d5标准储备液：100μg/ml，溶剂为甲醇，购自坛墨质检标准物质中心 。

标准中间液:移取氯霉素储备液和氯霉素-d5标准储备液各0.1ml，分别用甲醇稀释至10ml容量瓶中，配制成浓度为1.0μg/ml的氯霉素标准中间液及氯霉素-d5同位素标准中间液。

标准使用液:移取氯霉素中间液和氯霉素-d5标准中间液各1ml，分别用甲醇稀释至10ml容量瓶中，配制成浓度为0.1μg/ml的氯霉素标准使用液及氯霉素-d5同位素标准使用液。

分别移取0.1μg/ml的氯霉素标准使用液0、0.01、0.05、0.10、0.20、0.50ml分别置于10ml容量瓶中并加入氯霉素-d5同位素标准使用液0.2 ml以纯水定容至刻度，标准浓度为0 μg/l、0.1 μg/l、0.5 μg/l、1 μg/l、2μg/l、5μg/l， 氯霉素-d5浓度固定为2μg/l。

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

 取鱼肉5g，加氯霉素-d5同位素标准使用液0.2 ml、乙腈5ml、4%氯化钠溶液5ml，涡旋振荡2min，4000r/min离心10min，取上清液，残渣重复提取1次，合并上清液。加正己烷5ml,涡旋振荡1min，2000r/min离心10min，弃去上层液，正己烷重复处理1次。加水饱和的乙酸乙酯溶液5ml,涡旋振荡1min，2000r/min离心10min，上层液转移到20ml上样瓶中，重复提取1次，合并提取液，氮气吹干，加3ml5%乙腈水溶液溶解，混匀，备用待净化。

1.3.2 固相萃取净化 

ezseptmc18固相萃取柱（1000 mg/6ml，货号：pz10304）用10ml甲醇、10ml水依次进行活化，取1.3.1待净化液上样，上样结束后用3ml、3ml水淋洗萃取柱，再用4ml 50%甲醇水溶液洗脱萃取柱，收集洗脱液，加水饱和乙酸乙酯4ml，涡旋振荡1min，2000r/min离心5min，取上层液，重复处理1次，合并上层溶液，氮气吹至近干干。加1ml 50%甲醇水溶液溶解，混匀过微孔滤膜后供lc-ms/ms测定。

1.3.3 lc-ms/ms仪器条件

色谱柱：shim-pack velox c18（2.7μm，2.1*100mm）；

检测方式：多反应监测（mrm）；

流动相：a:水-b: 甲醇（50:50）；

流速：0.2ml/min；

进样量：1μl；

2，                      实验结果

图1 标液色谱图

图2氯霉素标准曲线图

3，                      结论 

本次实验展示了使用ezseptmc18固相萃取柱（1000 mg/6ml，货号：pz10304）对水产品中氯霉素进行净化，通过高效液相色谱串联质谱进行测定，其加标回收率在84.7%~105.2%之间，rsd在8.1%，能够满足标准要求。说明ezseptmc18固相萃取柱（1000 mg/6ml，货号：pz10304）能很好的完成方法中的净化工作，并且结果稳定、可靠。

4，                      参考文献

1.       《gb 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》

表 1   加标回收率结果