耗材专区血液中咖啡因的测定-必一运动

1、前言

咖啡因是一种黄嘌呤生物碱化合物，是一种中枢神经兴奋剂，能够暂时的驱走睡意并恢复精力，临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏。有咖啡因成分的咖啡、茶、软饮料及能量饮料十分畅销，因此，咖啡因也是普遍被使用的精神药品。适度地使用咖啡因具有舒张血管、促进血液循环、预防高血压、心肌梗塞、利尿、解毒、抗氧化、抗衰老、减肥等药理和生理作用，但是，大剂量或长期使用也会对人体造成损害，能够导致“咖啡因中毒”，如神经过敏，易怒，焦虑，震颤，肌肉抽搐（反射亢进），失眠和心悸。中国把咖啡因列为“精神药品”管制，属于一种毒品。目前有关咖啡因检测分析的研究报道不多，为此本文通过使用spe 1000全自动固相萃取系统对人体血液中咖啡因进行回收率测定分析，探索血液咖啡因样本检测的方法。

2、实验过程2.1仪器与试剂

spe 1000全自动固相萃取系统，莱伯泰科

mv5多通道平行浓缩系统，莱伯泰科

lc600 二元高压梯度高效液相色谱，莱伯泰科

ezsep^tmhlb固相萃取柱，（60mg/3ml北京莱伯帕兹检测科技有限公司货号：pz12602）

血液替代品：牛血清，市售

2.2工作液配制

咖啡因标准储备液：100μg/ml

咖啡因标准工作液：取1ml标准储备液放入10ml容量瓶中，用甲醇定容配置成10μg/ml标准工作液

2.3实验部分

2.3.1样品制备

取血液样本1ml加入磷酸盐缓冲液1ml平衡，加入50μl标准工作液，混合均匀，加标浓度为500ng/ml，待固相萃取。

2.3.2净化与浓缩

ezsep^tmhlb固相萃取柱，（60mg/3ml北京莱伯帕兹检测科技有限公司货号：pz12702）用5ml甲醇乙酸乙酯（1：1）、5ml水和5ml磷酸盐缓冲液进行活化，取全部样液上样，上样结束后用2ml磷酸盐缓冲液和2ml水淋洗萃取柱，在真空状态下干燥0.5min，最后用5ml 磷酸盐缓冲液近干后，用流动相定容至1ml 。涡旋混匀，0.22μm滤膜过滤，待检测。

2.3.3 高效液相色谱检测条件

色谱柱：promosil c18，5μm，4.6*150mm

波长：272nm

流速：1ml/min

柱温：40℃

进样量：20μl

流动相：甲醇-水= 24：76

3、实验结果

图1标准样品色谱图

图2加标样品色谱图

图3空白样品色谱图表1 加标回收率结果

4、结论

本次实验展示了一种使用ezsep^tmhlb固相萃取柱，（60mg/3ml北京莱伯帕兹检测科技有限公司货号：pz12702）对血液中咖啡因进行萃取净化，其加标回收率95.8%~99.2%，重复性rsd为1.6%。说明ezsep^tmhlb固相萃取柱适用于血液中咖啡因的检测，并且在回收率和平行性上表现优异。